• 蚌埠医学院第一附属医院骨科(安徽蚌埠 233004);
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目的 观察比较人正常和退变髓核的细胞学和生物学差异,并研究 IFG-1 和 PDGF 对人退变髓核的修复作用。方法 取患者自愿捐赠的人退变及正常髓核组织,一部分制作成组织切片,进行 HE 染色观察髓核退变前后形态变化,免疫组织化学染色观察Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、B 淋巴细胞瘤 2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X(Bcl-2 associate X,Bax)蛋白表达;另一部分髓核组织进行细胞培养,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot 检测Ⅱ型胶原蛋白表达。然后进行基因转染实验,分为 4 组,A 组为退变髓核细胞;B、C、D 组分别用 IGF-1 基因慢病毒颗粒、PDGF 基因慢病毒颗粒和携带 IGF-1、PDGF 双基因的慢病毒颗粒转染退变髓核细胞。转染 21 d,倒置显微镜观察各组细胞形态,流式细胞仪测定各组细胞 IGF-1 和 PDGF 阳性率,免疫组织化学染色和 Western blot 检测各组细胞Ⅱ型胶原蛋白表达。结果 HE 染色示,正常组中央髓核组织可见大量脊索细胞和少量类软骨细胞;而退变组髓核细胞明显减少,且髓核组织内可见大量纤维软骨组织。免疫组织化学染色示,退变组Ⅰ型胶原、Bax 蛋白阳性细胞百分比显著高于正常组,Ⅱ型胶原、Bcl-2 蛋白阳性细胞百分比显著低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot 检测示,退变组Ⅱ型胶原蛋白相对表达量显著低于正常组(t=65.493,P=0.000)。基因转染后 21 d,与 A 组比较,B、C、D 组细胞活性增加,形态变得较为规则。流式细胞仪检测示 B、D 组 IGF-1 阳性率较 A 组明显增高,C、D 组PDGF 阳性率较 A 组明显增高(P<0.05)。免疫组织化学染色观察示,A、B、C、D 组Ⅱ型胶原蛋白阳性染色情况依次为(±)、(+)、(+)、(++)。Western blot 检测示,A、B、C、D 组Ⅱ型胶原蛋白相对表达量依次增加,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IGF-1 与 PDGF 均能逆转椎间盘髓核细胞的退变且二者具有协同作用,为其今后应用于临床治疗椎间盘退变性疾病提供了实验依据。