孙周 1 , 汪雷 1 , 袁即山 1 , 邱健 2 , 肖黎 1 , 吕斌 1 , 丁华 1
  • 1. 江苏大学附属人民医院骨外科(江苏镇江 212000);
  • 2. 江苏大学医学院(江苏镇江 212013);
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目的 探讨印度豪猪(Indian Hedgehog,Ihh)/甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)通路对小鼠股骨骨折愈合的影响及干预作用。方法 取 6~7 周龄 C57BL/6J 雄性小鼠 50 只,随机分为正常组(A 组)、股骨骨折模型组(B 组)、PTH 促进剂 hPTH1-34 组(C 组)、Ihh 通路阻断剂环靶明(cyclopamine,CPM)组(D 组)、hPTH1-34+CPM 组(E 组),每组 10 只。除 A 组外,其余 4 组小鼠均构建右侧股骨开放性骨折髓内针固定模型;造模后 C、D、E 组分别皮下注射 40 μg/kg hPTH1-34、1.2 mg/kg CPM 及 40 μg/kg hPTH1-34+1.2 mg/kg CPM,A、B 组皮下注射等量生理盐水,1 次/d,共 14 d。末次给药 12 h 后,ELISA 法检测小鼠尾静脉血血清 ALP、钙(Ca)、磷(P) 含量;X 线片观察股骨骨折愈合情况并行骨折愈合评分;取股骨骨组织检测骨痂体积,行 HE 染色及番红 O-固绿染色检测各组骨组织病理变化,Western blot 法检测骨痂组织中 Ihh、Ihh 通路相关蛋白-跨膜转导蛋白(Smo)、GLI 家族锌指蛋白 1(Gli1)、PTH1 受体(PTH1 receptor,PTH1R)及软骨内成骨标志物性别决定区 Y 框蛋白 9(sex determining region Y box protein 9,Sox9)蛋白表达。结果 与 A 组相比,B、E 组可见骨折断端边缘模糊、有软骨骨痂和硬骨骨痂形成、肥大软骨细胞增多,钙化骨形成减少;与 B、E 组相比,C 组骨折断端边缘接近消失、纤维骨痂形成增多、肥大软骨细胞及钙化骨形成进一步增多;D 组可见骨折断端趋向模糊、骨痂形成少、肥大软骨细胞及钙化骨形成最少。B~E 组骨痂体积,血清 ALP、Ca、P 含量,骨痂组织中 Ihh、Smo、Gli1、PTH1R、Sox9 蛋白相对表达量均较 A 组增高,骨折愈合评分较 A 组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);C 组上述各指标均显著高于 B、E 组(P<0.05),D 组显著低于 B、E 组(P<0.05);B、E 组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hPTH1-34 促进骨折愈合的作用与 PTH/PTH1R/Ihh 通路激活有关,Ihh 通路阻断剂可逆转 hPTH1-34 对骨折愈合的促进作用。