• 中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院综合科 辽宁省口腔疾病重点实验室(沈阳 110002);
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目的 探讨浓缩生长因子(concentrated growth factor,CGF)联合矿化胶原(mineralized collagen,MC)材料对 BMSCs 黏附、增殖和分化的影响及其体内成骨效应,为 CGF 和 MC 材料在骨缺损再生修复中的联合应用提供理论基础。方法 取健康志愿者静脉血制成 CGF,然后制备 CGF 提取液(CGF extracts,CGFe)。体外实验:取人 BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)分为 4 组,A、B、C 组分别用含 2%、5%、10%CGFe 的 α-MEM 培养基(含 10%FBS 和 1% 双抗)培养;D 组用不含 CGFe 的 α-MEM 培养基(含 10%FBS 和 1% 双抗)培养。扫描电镜观察 CGFe 对细胞黏附的影响,细胞计数试剂盒 8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测 CGFe 对细胞增殖的影响,成骨诱导后行 ALP 活性检测及 Western blot 检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达。体内实验:取 18 只新西兰大耳兔,左、右侧下颌骨分别制备圆形骨缺损模型,分别植入 CGF 凝胶+MC 材料(实验组)和单纯 MC 材料(对照组)。术后 4、8、12 周分别处死 6 只兔取材,行 Micro-CT 扫描观察体内新骨形成及材料降解情况。结果 体外实验:扫描电镜观察示 A、B、C 组细胞在 MC 材料上铺展情况优于 D 组,伪足较多;CCK-8 法检测示不同浓度 CGFe 均能促进 MC 材料上细胞增殖,培养 2、3、5、7 d 细胞吸光度(A)值 C 组>B 组>A 组>D 组(P<0.05);ALP 活性检测示其活性与成骨诱导时间和 CGFe 浓度成正比(P<0.05);成骨诱导培养 14 d Western blot 检测示 A、B、C 组 OPN 蛋白相对表达量显著高于 D 组,且 CGFe 浓度越高,OPN 蛋白相对表达量越高(P<0.05)。体内实验:Micro-CT 观察示术后 4、8、12 周实验组新骨形成、材料降解均优于对照组。定量检测示,各时间点实验组新生骨体积、新生骨体积百分比、骨小梁数、骨小梁厚度均显著高于对照组,材料剩余体积、材料剩余体积百分比、骨小梁分离均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CGF 能有效促进 MC 材料上 BMSCs 的黏附、增殖及成骨分化,其中 10%CGFe 效果最显著。CGF 和 MC 材料联合应用可显著促进体内成骨。