• 上海交通大学附属第六人民医院骨科(上海 200233);
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目的 探讨内皮祖细胞来源小细胞外囊泡(endothelial progenitor cells derived small extracellular vesicles,EPCs-sEVs)对小鼠脊髓损伤的治疗效果。方法 取 20 只 C57BL/6 雄性小鼠股骨及胫骨骨髓分离培养 EPCs,采用双荧光染色及流式细胞术鉴定;然后对 EPCs 进行传代,收集 P2~P4 代细胞上清,以超速离心法提取 EPCs-sEVs,采用透射电镜、纳米流式检测仪及 Western blot 进行鉴定。取 40 只 C57BL/6 雌性小鼠随机分为 4 组(n=10),其中假手术组仅切除 T10 椎板,模型组以及低、高浓度干预组制备 T10 脊髓损伤模型;模型制备后 30 min、3 d 及 7 d 低、高浓度干预组经尾静脉分别注射浓度为 1×109、1×1010 个/mL 的 EPCs-sEVs。术后行小鼠行为学检测(BMS 评分、斜板实验、Von Frey 实验),术后 4 周取材行大体、HE 染色及免疫组织化学染色观察脊髓组织结构变化。另取 3 只 C57BL/6 雌性小鼠制备 T10 脊髓损伤模型后,经尾静脉注入 DiR 标记的 EPCs-sEVs,30 min 后活体成像仪观察 EPCs-sEVs 是否达脊髓损伤部位。结果 经鉴定,成功获取小鼠骨髓来源的 EPCs 及 EPCs-sEVs;活体成像仪观察显示 EPCs-sEVs 在注射后 30 min 内募集至脊髓损伤区域。行为学检测示,术后 2 周内两干预组 BMS 评分及斜板实验最大角度与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),2 周后均明显优于模型组(P<0.05);术后 4 周两干预组 Von Frey 实验示机械痛阈值明显高于模型组、低于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05);上述指标两干预组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,两干预组损伤节段脊髓组织缺损较小,单个核细胞浸润较少,组织结构恢复明显,血管新生更多(P<0.05);两干预组间无明显差异。结论 EPCs-sEVs 可促进小鼠脊髓损伤修复,为脊髓损伤的生物治疗提供了新的方案。

引用本文: 林俊卿, 黄腾立, 高涛, 郑宪友. 内皮祖细胞来源小细胞外囊泡促进小鼠脊髓损伤修复的实验研究. 中国修复重建外科杂志, 2021, 35(4): 488-495. doi: 10.7507/1002-1892.202009130 复制

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