• 1. 常州市亘从生物力学研究中心(江苏常州 213164);
  • 2. 宁夏人体组织器官库(银川 750004);
  • 3. 上海亚朋生物技术有限公司(上海 201201);
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目的 探讨脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)中 BMP-2 含量与其体内/外成骨活性的相关性,以期选择一种简易、便捷的评价 DBM 成骨活性的方法。方法 取 9 具供体左侧股骨中段组织,采用动态脱钙工艺制备 DBM(S1~S9),同时制备灭活 DBM(对照)。分别采用蛋白酶抑制剂法、胶原酶法、盐酸胍/EDTA 法、RIPA 裂解液法提取 S1~S9 以及灭活 DBM 中 BMP-2,测量比较不同 DBM 间 BMP-2 含量差异。取 S1~S9 以及灭活 DBM,分别与小鼠胚胎成骨细胞 MC3T3-E1 共培养,采用 MTT 法及荧光染色检测细胞增殖,同时检测 ALP 活性。取 30 只 BALB/c 雄性裸小鼠分为 10 组,分别为 S1~S9 DBM 组(S1~S9 组)以及灭活 DBM 组(对照组),每组 3 只。于各组小鼠双侧后肢大腿中部制备肌袋,植入对应 DBM 材料,术后 4 周取材行 HE 染色观察并半定量评价(新骨形成评分)。结果 不同供体骨制备的 DBM,其 BMP-2 含量存在差异;同一供体骨制备的 DBM,经不同提取方法获得的 BMP-2 含量也不同,其中盐酸胍/EDTA 法提取效率最高。体外成骨性能评价,共培养后各时间点 S4、S6 组细胞增殖、ALP 活性均较其他组明显增高(P<0.05),且 7 d 时 S4 组细胞增殖最显著(P<0.05);荧光染色示各组成骨细胞状态均良好,但 S1、S2、S3、S4、S6 组成骨细胞多于其他组。体内异位成骨诱导实验示,术后 4 周 S1~S6 组植骨区域均可见软骨和新骨生成,并且随着 BMP-2 含量增加,材料诱导新骨生成越多,新骨形成评分较高(P<0.05);其中 S4、S6 组骨新生区域含有大量软骨细胞和成骨细胞。结论 BMP-2 定量检测结合体外成骨细胞增殖分化实验可用于评估 DBM 成骨活性。