• 中国医学科学院整形外科医院颅颌面中心(北京 100144);
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目的 探讨丝素蛋白-左旋聚乳酸(silk fibroin-poly-L-lactic acid,SF-PLLA)微载体对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的扩增作用及对其分化能力的影响。方法 使用脂肪抽吸术患者自愿捐赠脂肪组织,经酶消化法提取 ADSCs。取第 3 代 ADSCs 分别接种于 CultiSpher G 和 SF-PLLA 微载体(分别设为 A、B 组),细胞-微载体复合物应用旋转生物反应器培养,并采用正常二维平面传代培养的 ADSCs 作为对照组(C 组)。应用扫描电镜观察两种微载体结构及细胞生长状况;Live/Dead 染色观察细胞在两种微载体上分布及成活情况;DNA 定量法检测两种微载体上细胞增殖情况;培养 18 d 实时荧光定量 PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测 3 组 ADSCs 成软骨、成骨、成脂相关基因表达,行流式细胞术鉴定 MSCs 表面标志物,并行成软骨、成骨、成脂三系分化鉴定。结果 ADSCs 在两种微载体上均可黏附并实现高效扩增,扩增 18 d 时两种微载体上 ADSCs 总扩增量差异无统计学意义(P>0.05)。对扩增所得 ADSCs 行 qRT-PCR 检测示,与 C 组比较,B 组成软骨相关基因(蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白、软骨特异性基因 SOX9)呈显著上调,A 组成脂相关基因(过氧化物酶体增殖物激活受体 γ、脂蛋白酯酶、脂联素基因)呈显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测与三系分化鉴定显示两种微载体扩增后细胞仍为 ADSCs,仍具有三系分化能力。结论 SF-PLLA 微载体可用于扩增 ADSCs,且扩增所得细胞成软骨分化趋势显著提高,成脂分化趋势降低。