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找到 作者 包含"刘毅" 25条结果
  • 携带人胰岛素基因慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的实验研究

    目的 构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和人胰岛素(insulin)基因的慢病毒载体,探讨其对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)的转染情况,为今后组织工程脂肪构建与体内回植研究奠定基础。 方法 采用DNA 重组技术,将insulin 基因克隆至带EGFP 的慢病毒表达载体pLenti6.3- 内部核糖体进入位点序列(internal ribosome entry site,IRES)-EGFP 中,筛选阳性克隆,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带目的基因的质粒pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP 共同转染到293T 细胞内包装病毒,荧光倒置相差显微镜观察包装细胞报告基因的表达情况。收集病毒上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度。取足月儿脐带以组织块培养法分离培养hUCMSCs,以不同感染复数(multiple of infection,MOI,分别为0、1、3、5、7、10、15、20)的重组慢病毒感染hUCMSCs,通过报告基因绿色荧光蛋白的表达筛选最适MOI;以最适MOI 重组慢病毒感染hUCMSCs,应用实时荧光定量PCR 及Western blot 法分别检测细胞中insulin 基因及insulin 蛋白水平的表达情况。 结果 成功构建了共表达insulin 基因和EGFP 基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP,并对其成功包装、纯化及浓缩,病毒滴度为1.3 × 108 TU/mL。不同MOI 的重组慢病毒感染hUCMSCs 后,通过绿色荧光蛋白表达的阳性细胞数筛选其最适MOI 为10,此时对细胞的转染效率可达到90%。实时荧光定量PCR 检测示转染组insulin mRNA 表达阳性,未转染组为阴性;Western blot 检测示转染组细胞内及上清液insulin 蛋白表达阳性,未转染组均为阴性。 结论 构建的携带insulin基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP 可有效转染hUCMSCs,表达insulin 蛋白。

    发表时间:2016-08-31 05:48 导出 下载 收藏 扫码
  • 评估狼疮肾炎活动性尿液标志物的研究进展

    狼疮肾炎是系统性红斑狼疮标志性特征之一,可见于40%~60%的患者,其特点是复发与缓解交替。肾脏穿刺活体组织检查是评估肾损害和疾病活动的金标准,但其为侵入性检测手段,并且有出血及感染的风险,不是十分适用于狼疮肾炎疾病活动性的监测。因此不少学者尝试通过一些无创或者微创的检测方法来评估狼疮肾炎疾病活动,而尿液凭借其具有容易获得性、并且可通过非侵入性途径获取的特点而成为研究的热点。目前这方面的研究主要集中在对狼疮肾炎患者尿液中生物标志物的研究,包括检测尿液中的趋化因子、细胞因子等,通过各种相关的检测手段以期发现一些关键的生物标志物来反映狼疮肾炎疾病活动性,已有一些生物标志物包括17相关细胞因子、叉头状转录因子、单核细胞趋化蛋白-1 等被报道和狼疮肾炎疾病活动有比较密切的关系。

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  • 食管溃疡致主动脉食管瘘一例

    发表时间:2016-08-30 06:32 导出 下载 收藏 扫码
  • hVEGF165 基因转染大鼠BMSCs 的实验研究

    目的 构建携带hVEGF165 基因的重组腺病毒载体pAdxsi- 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)-hVEGF165 ,体外转染大鼠BMSCs,观察转染后hVEGF165 的表达情况以及对BMSCs 生长增殖的影响,为进行血管再生的基因治疗奠定实验基础。 方法 将hVEGF165 从原始质粒切下连接到pShuttle- 巨细胞病毒-EGFP 重组穿梭载体,并转移至pAdxsi 载体上,获得重组腺病毒载体质粒pAdxsi-EGFP-hVEGF165 ,进行酶切鉴定及基因测序。采用PacI 限制性内切酶线性化pAdxsi-EGFP-hVEGF165 ,并转染人胚肾细胞HEK293,收获重组腺病毒,测定病毒滴度。贴壁法培养Wistar 大鼠BMSCs,体外转染携带EGFP 基因的重组腺病毒(pAdxsi-EGFP),荧光倒置相差显微镜及流式细胞术确定最佳病毒感染复数(multiplicities of infection,MOI)。依据最佳MOI 转染pAdxsi-EGFP-hVEGF165 至BMSCs,采用Western blot、RT-PCR 及ELISA 法检测转染后hVEGF165 的表达;MTT 法评价转染后BMSCs 生长增殖情况。 结果 酶切鉴定及基因测序提示重组腺病毒载体质粒含有hVEGF165 cDNA;经多轮感染、扩增后,病毒滴度可达1 × 1010 pfu/mL。荧光倒置相差显微镜观察转染pAdxsi-EGFP 后MOI 为150 pfu/cell 时转染效果最佳,流式细胞仪检测转染效率约88%。Western blot 和RT-PCR 检测示,pAdxsi-EGFP-hVEGF165 转染BMSCs 48 h 后在蛋白质和基因水平均可有效表达hVEGF165 ;ELISA 检测示其含量在7 d 达高峰,在20 d 时仍有表达,1、3、5、7、9、11、13、15、20 d 各时间点hVEGF165 含量均显著高于EGFP 基因转染组及未转染组(P lt; 0.05)。MTT 结果显示,各时间点转染pAdxsi-EGFPhVEGF165的BMSCs 与未转染组细胞的吸光度(A)值比较差异无统计学意义(P gt; 0.05)。 结论 BMSCs 是一种较理想的基因载体细胞,成功制备的重组腺病毒载体质粒可在MOI 值为150 时将hVEGF165 基因有效转染至BMSCs;转染后hVEGF165 表达水平较高、持续时间较长,且对BMSCs 的生长增殖无明显影响。

    发表时间:2016-08-31 05:42 导出 下载 收藏 扫码
  • 类风湿关节炎患者血清和关节液白细胞介素-17A与疾病活动的关系

    目的 检测类风湿关节炎(RA)患者血清和关节液白细胞介素17A(IL-17A)的变化,探讨其与临床炎症指标、疾病活动性的关系。 方法 2011年6月-2012年6月采用酶联免疫吸附试验检测30例活动性RA患者和20例健康对照血清IL-17A水平,其中18例有膝关节积液RA患者同时检测配对血清和关节液IL-17A水平。 结果 RA组患者血清IL-17A水平显著高于健康对照组[(40.651 ± 16.402)、(23.799 ± 10.693) pg/mL,P<0.05]。RA患者关节液IL-17A水平明显高于其血清中水平[(63.555 ± 23.405)、(43.727 ± 17.212) pg/mL,P<0.05]。RA患者血清IL-17A水平只与疾病活动性评分(DAS28)呈正相关(r=0.498,P=0.020),而RA患者关节液IL-17A水平与DAS28和血清C反应蛋白有相关性(r=0.515,P=0.029;r=0.498,P=0.035)。 结论 RA患者血清和关节液IL-17A水平与疾病活动性显著相关,提示IL-17A可作为衡量疾病活动和关节损伤的标志之一。

    发表时间:2016-09-07 02:34 导出 下载 收藏 扫码
  • 社区卫生服务机构开展艾滋病防治工作的成效及问题分析

    目的分析社区卫生服务机构开展艾滋病防治工作的成效和问题,为推进社区艾滋病防治工作提供科学依据。 方法调查获得2013年1月-12月某区社区卫生服务机构开展艾滋病防治工作相关资料和数据,分析以社区为基础开展艾滋病综合防治模式在病案管理、实验室检测和抗病毒治疗等方面的效果和问题。 结果截止2013年底,某区社区服务机构对符合管理的艾滋病感染者和患者的建档情况从2012年的无档案到建档率达100%,CD4 T淋巴细胞检测率从76.60%(360/470)提高到88.35%(508/575),抗病毒治疗覆盖率从81.40%(175/215)提高到84.41%(287/340)。但是在实际工作中仍然存在一些问题需要解决。 结论社区卫生服务服务机构开展艾滋病综合防治工作能够促进病案信息的准确性,提高管理率、检测率和治疗率。建议在感染者和患者集中的城市推广社区艾滋病综合防治管理模式。

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  • 沙利度胺联合柳氮磺吡啶能维持脊柱关节病的临床缓解

    目的观察沙利度胺联合柳氮磺吡啶治疗脊柱关节病(SpA)的疗效,从中探索其是否能使患者达到并维持临床缓解。 方法2011年1月-2013年6月采用前瞻性、非干预、不定期随访的方式,对门诊规则服用沙利度胺联合柳氮磺吡啶同时配合相应的非甾体类抗炎药>24周的70例SpA患者,进行Bath强直性脊柱炎疾病活动性指数、视觉模拟评分法评分、外周关节炎表现、红细胞沉降率、C反应蛋白的观察评价,并对影响该方案疗效的相关因素进行多因素分析。 结果该组合方案治疗24周后,SpA患者的总临床缓解率为72.9%,其中40例短病程SpA患者临床缓解率为90.0%,30例非短病程SpA患者临床缓解率为50.0%。两类患者观察指标治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05)。非短病程SpA女性患者疗效明显优于男性,短病程SpA男女患者疗效差异不明显。青年SpA患者与非青年SpA患者的临床缓解率相当。二分类logistic回归分析提示是否短病程[OR=3.408,95% CI(1.637,7.437),P=0.001]、是否城镇居民[OR=4.163,95% CI(2.011,8.761),P=0.001]与是否达到临床缓解有关。短病程和城镇居民更容易治疗后达到临床缓解。 结论使用沙利度胺联合柳氮磺吡啶的方案能使SpA患者达到临床缓解,男女均能得到较好的疗效,并能持续维持。该方案的临床缓解率还受病程长短、居住地等因素影响,但年龄、性别因素不会影响该方案疗效。短病程、城镇居民是治疗后达到临床缓解的独立因素。

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  • 116例非动脉炎性前部缺血性视神经病变发病相关因素的回顾性分析

    目的观察分析非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)患者发病的相关因素。 方法临床资料完整的NAION患者116例134只眼纳入研究。所有患者均详细询问病史、症状, 行视力、裂隙灯显微镜、间接检眼镜、视野、荧光素眼底血管造影(FFA)检查。同时行血压、血糖、血脂、头颅MRI或CT检查。排除疑似NAION、临床资料不完整者。回顾分析患者年龄、视野、FFA、全身及眼部因素、发病月份与NAION的关系。 结果116例患者中, 55~70岁80例, 占68.97%;其他年龄36例, 占31.03%。无全身疾病19例, 占16.3%;有全身疾病97例, 占83.7%。其中, 糖尿病38例, 占39.2%;高血压32例, 占32.9%;血脂异常28例, 占28.9%;腔隙性脑梗死等脑血管疾病16例, 占16.5%;冠心病6例, 占6.2%。眼局部因素中, 既往有白内障手术史3例, 占所有患者的2.6%;小视盘5例, 占所有患者的4.2%。糖尿病、高血压构成比与无糖尿病、高血压构成比比较, 差异有统计学意义(χ2=362、259, P<0.05)。发病时间3~4、9~10月者占全年发病的51.7%, 其他月份发病者占48.3%。3、4、9、10等4个月发病率与全年其他月份发病率比较, 差异有统计学意义(χ2=580, P<0.05)。视野检查结果显示, 下方视野缺损49只眼, 占36.5%;上方视野缺损12只眼, 占9.0%。FFA检查结果显示, 视盘早期弱荧光103只眼, 占76.9%;强荧光13只眼, 占9.7%。晚期强荧光110只眼, 占82.1%;弱荧光8只眼, 占6.0%。 结论糖尿病、高血压可能是NAION发病的危险因素; 春夏及秋冬季节转换可能也是NAION发病的另一危险因素。

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  • 基于专科医院某疾病诊断相关分组费用分析的管理思路探讨

    目的探索疾病诊断相关分组(diagnosis-related group,DRG)实施后的医院管理新思路,并提出相应的策略建议。方法2019 年 3 月通过文献研究法,查阅有关文件资料,以了解研究政策和背景。2019 年 4 月通过现场调研法,获得某三级甲等医院 2018 年全年的 DRG 分组数据、病案首页信息。选取入组患者例数最高的 DRG 组,再在该 DRG 组中选取患者例数较高的 2 个诊疗中心展开分析。结果共调查了 11 936 例患者的病案首页信息,覆盖 18 个主要诊断类目(major disease category,MDC)、93 个 DRG 细分组。其中,A 诊疗中心和 B 诊疗中心为入组例数较高的 2 个诊疗中心,共覆盖 8 个 MDC、34 个 DRG 细分组。A 诊疗中心共有患者 1 116 例,B 诊疗中心共有患者 470 例。2 个诊疗中心平均住院日差异无统计学意义(t=–1.926,P=0.054),病例组合指数相同(均为 0.82),但平均住院费用 B 诊疗中心比 A 诊疗中心高[(45 902.64±30 028.22)vs.(40 763.34±25 141.12)元,t=–3.260,P=0.001]。相对于 A 诊疗中心,B 诊疗中心药品费用[21 481.43(10 663.16,34 251.64)vs. 11 740.36(5 818.37,21 572.09)元,Z=–9.812,P<0.001]、其他费用[138.00(84.00,178.00)vs. 120.00(72.00,155.28)元,Z=–3.573,P<0.001]较高,医技费用和护理费用较低[(7 319.11±3 781.52)vs.(10 995.61±4 784.55)元,t=12.324,P<0.001;(578.42±226.82)vs.(882.99±781.63)元,t=8.187,P<0.001]。结论疾病诊疗规范有待加强,流程有待优化。在下一步的医院管理中,要关注重点指标,完善绩效考核;规范诊疗流程,推动临床路径;深度数据挖掘,绩效精细管理。

    发表时间:2020-02-03 02:30 导出 下载 收藏 扫码
  • 关节镜下自体同侧腓骨长肌腱重建膝关节前交叉韧带

    目的探讨采用关节镜下自体同侧腓骨长肌腱(peroneus longus tendon,PLT)重建前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)的疗效。方法回顾分析 2017 年 10 月—2018 年 10 月采用关节镜下自体同侧 PLT 重建治疗的 35 例 ACL 断裂患者临床资料。男 19 例,女 16 例;年龄 18~60 岁,平均 43.4 岁。左膝 20 例,右膝 15 例。致伤原因:交通事故伤 14 例,摔伤 13 例,运动损伤 8 例。受伤至手术时间 3~9 d,平均 4.7 d。患者术前膝关节肿胀、疼痛伴活动受限。入院检查前抽屉试验、Lachman 试验、轴移试验均为阳性;MRI 检查确诊为 ACL 断裂。术后每 3 个月随访 1 次,直至膝关节功能恢复正常。通过 MRI 和 X 线片检查观察腱骨愈合情况与 Endobutton 钢板和空心钉位置,并进行前抽屉试验、Lachman 试验、轴移试验观察膝关节活动度恢复情况。采用国际膝关节文献委员会(IKDC)评分、Lysholm 评分、膝关节损伤和骨关节炎(KOOS)评分评价患者关节功能改善情况。结果35 例患者均获随访,随访时间 12~18 个月,平均 14.2 个月。术后患者切口均Ⅰ期愈合,无感染、关节僵硬和再断裂等并发症发生。术后前抽屉试验、Lachman 试验、轴移试验均为阴性。MRI 示 ACL 连续,股骨远端隧道和胫骨近端隧道腱骨愈合良好;X 线片示 Endobutton 钢板和空心钉位置稳定。术后 3、6、12 个月 IKDC 评分、Lysholm 评分及 KOOS 评分均较术前显著改善,术后随时间延长,各评分均进一步改善,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论关节镜下自体同侧 PLT 重建 ACL 断裂后患者恢复快,关节功能良好且稳定性强,临床疗效满意。

    发表时间:2020-07-27 07:36 导出 下载 收藏 扫码
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