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找到 关键词 包含"BMSCs" 144条结果
  • 缺氧对hBMSCs 和胎盘来源MSCs 增殖的影响

    目的 比较hBMSCs 和人胎盘基蜕膜MSCs(human placental decidua basalis-MSCs,hPDB-MSCs)在化学缺氧条件下的增殖情况,为寻找组织工程新的种子细胞提供理论依据。 方法 采用密度梯度离心法分离培养hBMSCs 与hPDB-MSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物;CoCl2 建立化学缺氧模型,MTT 法检测两种细胞在不同CoC12 浓度(0、50、75、100、125、150、175、200 μmol/L)和不同时间(6、12、24、48、72 和96 h)的增殖情况。 结果 流式细胞仪检测显示hPDB-MSCs 与hBMSCs 均表达 CD9、CD29、CD44、CD105、CD106、人类白细胞抗原ABC(humanleucocyte antigen ABC,HLA-ABC),不表达CD34、CD40L 和HLA-DR;但与hBMSCs 相比,hPDB-MSCs 阶段特异表达的胚胎抗原1(stage-specific embryonic antigen 1,SSEA-1)、SSEA-3、SSEA-4、肿瘤排斥抗原(tumor rejection autigen,TRA)-1-60、TRA-1-81 表达更高。化学缺氧12 h 内,hBMSCs 与hPDB-MSCs 增殖均被抑制,12 h 后均能促进增殖;与对照组比较,hBMSCs 经150 μmol/L CoCl2 作用24 h 出现显著增殖(P lt; 0.05),hPDB-MSCs 在75 μmol/L CoCl2 作用12 h 后出现显著增殖(P lt; 0.05)。 结论 与hBMSCs 相比,hPDB-MSCs 表达更高的胚胎干细胞特有表面抗原,同时对化学缺氧所致的增殖影响更为敏感,可能成为一种新的组织工程种子细胞来源。

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • 成骨细胞条件培养液对BMSCs 诱导分化作用研究

    目的 探讨大鼠成骨细胞条件培养液对同种大鼠BMSCs 的成骨诱导分化作用,为骨组织工程种子细胞的获得寻找一种新方法。 方法 健康1 周龄SD 大鼠10 只,雌雄不限,体重20 ~ 30 g,采用贴壁法和酶消化法分别获得BMSCs 和成骨细胞,并进行鉴定。无菌条件收集第1 ~ 5 代成骨细胞培养液上清,与完全培养基1 ∶ 1 混合,制备成骨细胞条件培养液,与第2 代BMSCs 共培养为诱导组,相同代次BMSCs 与完全培养液共培养为对照组。倒置相差显微镜下观察共培养后BMSCs 形态变化,MTT 法检测BMSCs 生长情况,免疫组织化学染色检测共培养后BMSCs 的ALP、Col Ⅰ、骨钙素(osteocalcin,OCN)蛋白的表达,采用 RT-PCR 检测Col Ⅰ、OCN mRNA 的表达。 结果 诱导组共培养7 d BMSCs 体积变大,细胞由长梭形展开为扁平形和多边形,并带有突起;9 d 细胞呈集落状生长。细胞生长曲线示BMSCs 数量随培养时间延长而增加,对照组增殖能力较诱导组强;诱导培养4 ~ 7 d,对照组细胞数量与诱导组比较差异有统计学意义(P lt; 0.05)。诱导组培养12 d,ALP 染色呈阳性表达;18 d 出现钙结节;21 d Col Ⅰ和OCN 呈阳性表达;对照组均呈阴性表达。RT-PCR 检测示诱导组培养21 d 有Col Ⅰ、OCN mRNA 表达,对照组未见表达。 结论 体外大鼠成骨细胞条件培养液有明显的诱导同种大鼠BMSCs 向成骨样细胞分化的作用。

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • 瘦素对hBMSCs 成骨分化的作用及机制研究

    目的 探讨瘦素(leptin,LEP)对 hBMSCs 成骨分化的作用及机制。 方法 采用全骨髓法培养hBMSCs,取第3 代hBMSCs 分为A、B、C、D、E、F 组,待细胞贴壁后各组分别加入400、200、100、50 ng/mL LEP 、100 ng/ mL BMP 和普通培养基2 mL 进行培养。于培养后7 d 行ALP 染色、21 d 行矿化结节染色,倒置相差显微镜观察染色结果;并于培养后7、14、21 d,检测各组ALP 活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)水平,筛选 LEP 的最佳诱导浓度;B、E、F 组细胞培养7 d 后,采用 RT-PCR 检测成骨相关基因:核心结合因子(core-binding factor α1,Cbfα1)、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA 的表达。 结果 诱导培养7 d,ALP 染色结果显示,A、B、C、D、E 组细胞胞浆均呈蓝色阳性着色,F 组呈弱阳性;诱导培养21 d,矿化结节染色结果显示,A、B、C、D、E 组细胞染色呈阳性,F 组呈阴性。B 组培养后7、14、21 d,ALP、OCN 活性低于 E 组,但显著高于其余各组,差异均有统计学意义(P lt; 0.05),200 ng/mL LEP 为最佳浓度。B、E、F组细胞培养7 d,F 组Cbfα1、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA 均不表达;B、E 组各产物mRNA 均有表达,但B 组低于E 组。 结论 LEP 可促进 hBMSCs 成骨分化,其机制可能为LEP 促进了成骨相关基因的表达

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • BMSCs- 壳聚糖凝胶复合体移植治疗椎间盘退变的实验研究

    目的 探讨兔BMSCs- 壳聚糖凝胶复合体移植治疗椎间盘髓核缺损退变的效果,为临床应用提供实验依据。 方法 6 只健康1 月龄新西兰白兔,雌雄不限,体重1.0 ~ 1.5 kg。取骨髓2 mL,分离培养BMSCs。取第3代BMSCs,5-BrdU 活细胞示踪剂标记,与壳聚糖凝胶混匀,制备BMSCs- 壳聚糖凝胶复合体。将6 只动物建立兔椎间盘髓核缺损退变模型,并随机分为3 组(n=2):正常对照组仅分离暴露椎间盘,不作任何处理;移植治疗组将30 μL 自体BMSCs- 壳聚糖凝胶复合体注射入缺损椎间盘中心;缺损退变组仅注射入0.01 mol/L PBS 液30 μL。移植后4 周处死动物,取出移植修复的椎间盘,行细胞5-BrdU 标记检测、HE、aggrecan 番红O 染色及Col Ⅱ免疫组织化学染色;Col Ⅱ免疫组织化学染色切片行灰度值测定。 结果 细胞标记检测发现,自体BMSCs 移植后继续存活并增殖,形成细胞克隆。正常对照组及移植组椎间盘HE 染色示椎间盘结构清晰,髓核组织及外周纤维环分界清晰,细胞核及细胞浆染色明显;缺损退变组示椎间盘结构紊乱,髓核组织和外周纤维化分界不清。aggrecan 番红O 染色示正常对照组及移植治疗组椎间盘染色明显,椎间盘结构清晰;缺损退变组椎间盘结构紊乱,髓核组织和外周纤维化分界不清。Col Ⅱ免疫组织化学染色示正常对照组以中央髓核组织染色为主,呈黄褐色阳性反应,椎间盘结构清晰;移植治疗组中央髓核组织呈阳性反应,细胞间质可见明显黄褐色,大体结构仍保持完整;缺损退变组染色较前两组浅,且结构不清。3 组Col Ⅱ免疫组织化学染色切片行灰度值测定,正常对照组为223.84 ± 3.93,与移植治疗组(221.03 ± 3.53)比较差异无统计学意义(P gt; 0.05),但两组与缺损退变组(172.50 ± 3.13)比较,差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。 结论 兔BMSCs- 壳聚糖凝胶复合体可修复椎间盘缺损退变,为临床应用可注射式组织工程髓核移植治疗椎间盘退变奠定实验基础。

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • BMSCs 在肿瘤治疗中的研究进展

    目的 综述BMSCs 在肿瘤治疗中的研究进展。 方法 广泛查阅近年国内外相关文献,对BMSCs肿瘤趋向性、与肿瘤组织生长的相互关系以及作为肿瘤治疗运载细胞的研究进行回顾性总结与分析。 结果 BMSCs对肿瘤组织具有体内定向迁移能力,可抑制或促进肿瘤组织生长,可以作为肿瘤基因治疗的运载细胞;但BMSCs 具有向肿瘤转化的可能。 结论 BMSCs 可能成为肿瘤治疗的良好运载细胞,但尚需进一步研究,以加强其在肿瘤治疗中的安全 性。

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • 上皮细胞条件培养液对BMSCs 分化的影响

    目的 探讨上皮细胞条件培养液(epithelial cell conditioned medium,ECCM)体外诱导犬BMSCs 向上皮细胞分化的可行性。 方法 成年健康雄性比格犬1 只,体重10 kg。于犬髂后上棘采用骨髓穿刺法取骨髓5 mL,分离培养BMSCs。取犬口腔黏膜下组织,剪成约 4 mm × 4 mm 大小,制备ECCM。取第2 代BMSCs 以2 × 104 个/ 孔细胞密度接种,实验组于ECCM 中培养,对照组于低糖DMEM 完全培养基中培养。观察两组细胞形态特征,MTT 法绘制生长曲线,诱导培养21 d 免疫组织化学染色鉴定上皮细胞特异性标志物——细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK-19)和细胞角蛋白AE1/AE3,透射电镜观察细胞超微结构。 结果 倒置相差显微镜下见两组细胞均呈长梭形,均匀分布,折光性较强,增殖迅速。两组细胞生长曲线均呈“S”形,实验组生长曲线较对照组右移,提示ECCM 对细胞增殖有抑制作用。实验组CK-19 和细胞角蛋白AE1/AE3 免疫组织化学染色均呈阳性反应,对照组呈阴性。透射电镜下实验组细胞胞浆内可见紧密连接。 结论 ECCM 体外有诱导同种BMSCs 向上皮细胞分化的作用。

    发表时间:2016-09-01 09:06 导出 下载 收藏 扫码
  • 自体BMSCs 复合胶原膜修复猪全层皮肤缺损

    目的 探讨自体BMSCs 与胶原膜复合构建组织工程皮肤修复小型香猪全层皮肤缺损,为组织工程皮肤的临床应用提供实验依据。 方法 取4 只贵州小型香猪骨髓各20 mL 培养BMSCs,传至第3 代。取新鲜牛肌腱通过化学交联的方法制备成直径为5 cm 的圆形Ⅰ型胶原膜。将密度为2 × 107 个/mL 第3 代BMSCs 用DAPI 标记后种植到Ⅰ型胶原膜上孵育24 h,制备组织工程皮肤。在猪背部正中线两侧分别由前向后切取5 个直径5 cm、深达筋膜的圆形全层皮肤缺损创面,随机分为两组(n=10)。对照组行单纯Ⅰ型胶原膜修复,实验组行组织工程皮肤修复。于术后3、8 周,观察创面愈合情况,并取材行HE 染色及透射电镜观察,并于术后3 周对实验组行荧光显微镜及糖原染色观察。 结 果 动物均存活至实验完成。术后3 周对照组创面约40% 皮肤发黑、结痂、坏死,8 周时仍见坏死组织且瘢痕挛缩明显;术后3 周实验组创面皮肤成活,无明显瘢痕形成,8 周创面愈合良好;两组创面愈合率差异有统计学意义(P lt; 0.01)。组织学观察:术后3 周对照组可见肉芽组织增生,无表皮层覆盖;实验组具有良好的表皮和真皮结构,糖原染色可见基底膜呈完整连续深红染色。术后8 周两组均形成正常皮肤样结构。透射电镜观察:术后3 周对照组真皮层有大量中性粒细胞和成纤维细胞,未见表皮超微结构;实验组可见大量表皮细胞并以桥粒相连,表皮基底细胞与基膜以半桥粒连接;真皮层可见大量成纤维细胞,以及细胞外大量胶原微纤维沉积,可见内皮细胞形成的毛细血管。术后3 周实验组荧光显微镜观察,带有DAPI 标记的BMSCs 定位于重建的表皮和真皮组织中,表皮主要定位于基底膜附近,真皮层可见大量荧光标记的BMSCs。 结 论 以自体BMSCs 为种子细胞与胶原膜复合构建组织工程皮肤,可有效修复猪全层皮肤缺损,有望成为一种较理想的组织工程皮肤。

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
  • 双相陶瓷样生物骨修复节段性骨缺损实验研究

    目的 探讨组织工程双相陶瓷样生物骨(biphasic ceramic-like biologic bone,BCBB)修复节段性骨缺损的成骨作用。 方法 取2 周龄日本大耳白兔股骨、胫骨骨髓,分离培养第3 代BMSCs,将密度为1 × 107 个/mL 细胞悬液20 μL 接种至15 mm × 5 mm × 5 mm BCBB 骨块,复合培养8 d 构建组织工程BCBB。另取成年日本大耳白兔48 只,雌雄不限,体重2.5 ~ 3.0 kg,随机分成A、B、C、D 4 组(n=12),制备兔双侧桡骨1.5 cm 骨缺损模型。各组骨缺损处分别植入不同材料,A 组:植入复合有BMSCs 的组织工程BCBB;B 组:单纯植入BCBB;C 组:植入自体髂骨;D 组:不植入任何材料,作为空白对照。术后4、8、12、24 周取材,经大体观察、X 线片和组织学检测,评价组织工程BCBB 的成骨作用。 结果 X 线片观察:A、B 组术后4 周,材料密度较宿主骨高,材料与宿主骨分界清楚;8 周A、B 组材料与宿主骨分界模糊;12 周A 组材料边缘部分密度接近桡骨,中份有部分高密度影,B 组大部分材料呈高密度影;24 周A 组髓腔再通,少量未吸收的材料密度增高,B 组材料仍有部分高密度影;C 组术后4 周植骨与宿主骨分界模糊,8 周形成髓腔,12 周完成髓腔改建,24 周植骨部位密度与宿主骨一致,未见残余高密度影;D 组各时间点均未见骨连接或髓腔再通。X 线片评分:A 组术后12、24 周均优于B 组,差异有统计学意义(P lt; 0.05);但A、B 组各时间点均低于C 组,差异有统计学意义(P lt;0.05)。组织学观察:A 组材料内有新骨形成及新骨贴附材料生长,而B 组见新骨贴附材料生长,随时间推移材料逐渐降解吸收,新骨形成增多。A 组术后12、24 周新骨形成面积大于B 组,差异有统计学意义(P lt; 0.05),但A、B 组在各时间点均少于C 组(P lt; 0.05)。 结论 组织工程BCBB 成骨能力强于单纯BCBB,BCBB 可用作骨组织工程的支架材料。

    发表时间:2016-09-01 09:06 导出 下载 收藏 扫码
  • 成骨细胞特异性钙黏蛋白涂布脱钙骨基质材料对BMSCs 黏附及成骨分化能力的影响

    目的 探讨成骨细胞特异性钙黏蛋白(cadherin ectodomain Ⅱ,Cad- Ⅱ)涂布于同种异体脱钙骨基质材料(freeze-dried demineralized bone matrix,FDBM)对兔BMSCs 黏附、增殖及成骨分化能力的影响。 方法 取4 周龄日本大耳白兔10 只,体重0.61 ~ 0.88 kg,雌雄不限,常规分离培养BMSCs。取第2 代BMSCs(细胞密度1 × 106 个 /mL)分别与经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(实验组)和未经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(对照组)复合,行MTT 检测细胞增殖能力,细胞黏附实验检测细胞上架率和上架数,倒置相差显微镜、扫描电镜及HE 染色观察细胞生长情况。另取第2 代BMSCs(细胞密度5 × 105 个/mL)分别与经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(实验组)和未经Cad- Ⅱ修饰的FDBM(对照组)复合培养,行ALP 活性检测和骨钙素免疫组织化学染色观察细胞成骨分化情况。 结果 MTT 检测发现BMSCs 在经Cad- Ⅱ修饰的支架材料上能正常增殖,但与对照组比较差异无统计学意义(P gt; 0.05)。实验组细胞上架率为87.41% ± 5.19%,明显高于对照组35.56% ± 1.75%(P lt; 0.01);对照组每片材料细胞上架数平均为 2.6 × 104 个,实验组平均高达5.0 × 105 个,明显多于对照组(P lt; 0.05)。倒置相差显微镜、扫描电镜及HE 染色观察均显示实验组支架上黏附细胞数量明显多于对照组。成骨诱导培养7 d,实验组和对照组细胞均可表达骨钙素,具有成骨细胞表型;培养14 d,实验组和对照组ALP 活性分别为29.33 ± 1.53 和18.31 ± 1.32,骨钙素免疫组织化学染色阳性率分别为83% ± 7% 和56% ± 7%,两组比较差异均有统计学意义(P lt; 0.01);与同组7、21 d 比较差异有统计学意义(Plt; 0.01),7 d 与21 d 组间及组内比较差异均无统计学意义(P gt;0.05)。 结论 Cad- Ⅱ修饰的FDBM 对BMSCs 增殖无明显促进作用,但能提高细胞黏附性,并促进BMSCs 向成骨细胞分化。

    发表时间:2016-09-01 09:06 导出 下载 收藏 扫码
  • hBMSCs 的生物打印初步研究

    目的 初步确立hBMSCs 的二维生物打印方法,实现对细胞喷射过程的控制并保持打印后细胞活力。 方法 取健康志愿者骨髓5 mL,常规培养hBMSCs 至第2 代,调整为1 × 106 个/mL 单细胞悬液。实验分3 组:打印组1 细胞先行碘化丙啶(propidium iodide,PI)荧光标记,快速成型组织打印机进行二维细胞打印,x 轴间隔300 μm,y 轴间隔1 500 μm,激光共聚焦显微镜观察。打印组2 细胞未行PI 标记,经生物打印后培养2 h,Live/Dead viability Kit 测定细胞活力,激光共聚焦显微镜观察细胞荧光染色情况;取1 份未经Live/Dead viability Kit 测试的打印组2 细胞,培养7 d 后倒置显微镜观察细胞形态,贴壁后常规培养,动态观察细胞生长状态。对照组除细胞悬液不行打印,其余操作同打印组2。 结果 打印组1 细胞激光共聚焦显微镜观察,“细胞墨滴”在二维组织中规则且均匀分布,满足二维设计细胞打印要求;每个“细胞墨滴”包含细胞15 ~ 35 个。打印组2 细胞经活力测试,细胞孵育30 min 后激光共聚焦显微镜观察显示细胞荧光染色情况。对照组细胞活力与打印组2 无明显区别。打印后细胞常规培养7 d,细胞可正常贴壁生长,形态、生长状态良好。 结论 通过生物打印技术可实现hBMSCs 在二维平面上的定向、定量规则分布,并为进一步的细胞三维打印乃至器官打印体系奠定基础。

    发表时间:2016-09-01 09:05 导出 下载 收藏 扫码
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